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期刊论文 2

年份

2022 1

2016 1

关键词

CRISPR 1

Cas9 1

基因编辑 1

碱基编辑 1

结核分枝杆菌 1

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排序：展示方式：

Functional characterization of a thermostable methionine adenosyltransferase from

Yanhui Liu,Biqiang Chen,Zheng Wang,Luo Liu,Tianwei Tan

《化学科学与工程前沿（英文）》 2016年第10卷第2期页码 238-244 doi: 10.1007/s11705-016-1566-2

摘要： MATTt (a thermostable methionine adenosyltransferase from HB27) was overexpressed in and purified using Ni-NTA affinity column. The enzymatic activity of MATTt was investigated in a temperature range from 30 °C to 90 °C, showing that MATTt exhibited a high enzymatic activity and good thermostability at 80 °C. Circular dichroism spectra reveals that MATTt contains high portion of -sheet structures contributing to the thermostability of MATTt. The kinetic parameter, is 4.19 mmol/L and 1.2 mmol/L for ATP and methionine, respectively. MATTt exhibits the highest enzymatic activity at pH 8. Cobalt (Co ) and zinc ion (Zn ) enhances remarkably the activity of MATTt compared to the magnesium ion (Mg ). All these results indicated that the thermostable MATTt has great potential for industry applications.

关键词： ion-preference methionine adenosyltransferase secondary structure thermostability Thermus thermophilus

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用于分枝杆菌碱基编辑的PAM扩展型嗜热链球菌Cas9 C到T和C到G碱基编辑器 Article

张洪源, 张翼飞, 王卫晓, 陈未中, 张侠, 黄行许, 陈伟, 季泉江

《工程（英文）》 2022年第15卷第8期页码 67-77 doi: 10.1016/j.eng.2022.02.013

摘要：

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB）耐药性是临床治疗面临的重大挑战，迫切需要开发治疗耐药结核病的新型策略，而简单易用的MTB遗传操作方法能够加速这一进程。依赖于规律成簇的间隔短回文重复序列（CRISPR）的碱基编辑器能够快速有效地进行碱基编辑和基因失活，然而，目前还没有开发出可用于MTB的碱基编辑器。通过筛选不同的碱基编辑器，发现广泛使用的酿脓链球菌CRISPR相关蛋白9（SpCas9）或毛螺科菌Cpf1（LbCpf1）胞嘧啶碱基编辑器在分枝杆菌中不具有活性，而嗜热链球菌Cas9（St1Cas9）胞嘧啶碱基编辑器活性较好。虽然使用St1Cas9 胞嘧啶碱基编辑器能够实现C到T的碱基编辑，但是，在碱基编辑过程中却产生了大量的副产物。将尿嘧啶-N-糖基化酶抑制剂或尿嘧啶-N-糖基化酶分别融合到St1Cas9 胞嘧啶碱基编辑器中，得到了两种新的碱基编辑器——CTBE和CGBE，能将C分别转化为T或G。将CTBE和CGBE用于耻垢分枝杆菌的基因编辑时，产物的纯度得到了提高，并且能够进行多位点编辑。此外，由于野生型St1Cas9 在靶向DNA序列时需要识别严格的前间隔序列邻近基序（PAM），因此，通过结构介导的蛋白质工程设计了PAM扩展的St1Cas9，扩大了碱基编辑器的靶向范围。首先在耻垢分枝杆菌中测试了CTBE和CGBE的编辑效率，随后测试了CTBE在MTB中的编辑效率。本文提出的方法显著减少了在MTB中进行精确遗传操作所需要的时间，并将推动分枝杆菌功能基因组学、抗生素-耐药性机制研究和药物-靶点研究的发展。

关键词： CRISPR Cas9 结核分枝杆菌基因编辑碱基编辑